पीसीआर - पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन   - यह आणविक जीव विज्ञान की उपलब्धियों पर आधारित एक आधुनिक उच्च-सटीक निदान पद्धति है और कृत्रिम रूप से निर्मित स्थितियों (इन विट्रो) में एंजाइमों के प्रभाव के तहत कुछ डीएनए वर्गों को बार-बार दोहराकर रोगों की एक पूरी श्रृंखला के रोगजनकों की उपस्थिति स्थापित करने की अनुमति देता है।

परिणामस्वरूप, केवल वे खंड जो निर्दिष्ट आवश्यकताओं को पूरा करते हैं, की प्रतिलिपि बनाई जाती है, और केवल उन मामलों में जहां वे विश्लेषण किए गए नमूने में उपलब्ध हैं। रोग के स्रोत की पहचान करने के लिए, यह पर्याप्त है कि नमूने में इस रोगज़नक़ के कम से कम कई डीएनए अणु होते हैं।

सबसे अधिक बार, पीसीआर का उपयोग जननांग और मूत्र संबंधी रोगों के निदान के लिए किया जाता है। एक सस्ती कीमत पर अध्ययन के मानक सेट में आमतौर पर 12 पैथोलॉजी के प्रेरक एजेंटों की पहचान करने के लिए परीक्षणों की नियुक्ति शामिल है।

पीसीआर का प्रदर्शन कैसे किया जाता है?

पीसीआर विश्लेषण से कई बीमारियों के बैक्टीरिया का पता चलता है। चिकित्सा क्लीनिकों में, अध्ययन के एक जटिल में आमतौर पर निम्नलिखित बैक्टीरिया के स्रोतों की पहचान करना शामिल होता है:

• क्लैमाइडिया;
• हेपेटाइटिस बी और सी;
• mycoplasmosis;
• ureaplasmosis;
• गार्डनरेलोसिस (बैक्टीरियल वेजिनोसिस);
• थ्रश (कैंडिडिआसिस);
• संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस;
• trichomoniasis;
• एचपीवी (मानव पेपिलोमावायरस);
• तपेदिक;
• दाद वायरस;
• एचआईवी (एड्स)।

हेरफेर की तैयारी करने से पहले, कुछ प्रतिबंधों को देखा जाना चाहिए। आपको निर्धारित प्रक्रिया की तारीख से पहले दिन के दौरान सेक्स से इंकार कर देना चाहिए, न करें और न करें दवाओं   (एंटीबायोटिक्स, विरोधी भड़काऊ दवाएं, आदि)। सुबह की सुबह आप नाश्ता नहीं कर सकते हैं और कोई भी पेय नहीं पी सकते हैं। पुरुषों को परीक्षा से 2 घंटे पहले पेशाब करने से बचना चाहिए। बाहर ले जाते समय, मूत्रमार्ग के म्यूकोसा के उपकला कोशिकाओं का स्क्रैपिंग (पुरुष रोगियों में) किया जाता है या ग्रीवा नहर   गर्भाशय ग्रीवा (महिलाओं में)। सामग्री के नमूने की प्रक्रिया विशेष उपकरणों का उपयोग करके बाँझ परिस्थितियों में की जाती है।

नियुक्ति के लिए संकेत

• जननांग पथ से असामान्य (बहुत मोटी, प्रचुर) निर्वहन;
• अंतरंग अंगों के क्षेत्र में खुजली, जलन और दर्द की उपस्थिति;
• एक यादृच्छिक साथी के साथ असुरक्षित यौन संपर्क के बाद कुछ समय;
• उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी करने के लिए;
• जननांग अंगों के सर्जिकल उपचार से पहले;
• बांझपन या गर्भपात का कारण स्थापित करने के लिए।

उपचार के सिद्धांत

विश्लेषण के लिए एक धब्बा लेने के दो दिन बाद 12 संक्रमणों के लिए पीसीआर का परिणाम प्राप्त किया जा सकता है। में स्वस्थ व्यक्ति   शरीर में उपरोक्त रोगों के संक्रमण अनुपस्थित होने चाहिए।

यदि किसी भी संक्रमण का पता चला है, तो उपचार विशेष रूप से चिकित्सक द्वारा निर्धारित किया जाना चाहिए, जिसने परीक्षा के लिए रेफरल लिखा था। चिकित्सा सिफारिशों को लागू करने की प्रक्रिया में, सभी बिंदुओं का सख्ती से अनुपालन करना और आवश्यक खुराक में निर्धारित समय के लिए ड्रग्स लेना आवश्यक है। अन्यथा, रोग का एक जीर्ण रूप में संक्रमण या गंभीर जटिलताओं की उपस्थिति संभव है।

मतभेद

व्यावहारिक रूप से कोई कारक नहीं हैं जिसमें 12 संक्रमणों के पीसीआर विश्लेषण को निषिद्ध किया जा सकता है। हेरफेर को अधिक सुविधाजनक समय तक स्थगित किया जा सकता है केवल अगर रोगी अस्वस्थ महसूस करता है या तीव्र रूप में अन्य रोग (उदाहरण के लिए, फ्लू) है।

पीसीआर 12, जिसकी कीमत काफी उचित है, खतरनाक बीमारियों के प्रेरक एजेंटों का समय पर पता लगाने और जटिलताओं की घटना से बचने के लिए अधिक महंगे उपचार की आवश्यकता होती है।

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एसटीडी और पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (व्याख्यान) की प्रयोगशाला निदान

पीएचडी पोक्रोव्स्काया एम.एस.,
  corr। RAMS, प्रो। स्मिरनोव जी.बी.
  (एनआईईएम उन्हें। एनएफ गामेली रैमएस और जेएससी "एलएजीआईएस")

परिचय

यह लंबे समय से ज्ञात है कि एक मरीज को ठीक करने के लिए, आपको यह जानना होगा कि वास्तव में वह किस बीमारी से पीड़ित है। रोग के प्रकार को निर्धारित करने की प्रक्रिया को निदान कहा जाता है। किसी भी बीमारी का निदान डॉक्टर द्वारा किया जाता है (एनामनेसिस के अध्ययन के आधार पर, नैदानिक \u200b\u200bअभिव्यक्तियों और डेटा विश्लेषण का अवलोकन प्रयोगशाला अनुसंधान), जिसके बाद वह उपचार निर्धारित करता है। आजकल, निदान करते समय, चिकित्सक प्रयोगशाला परीक्षणों के डेटा का उपयोग करता है, जिसके बिना या तो सही निदान करना मुश्किल है, या कुछ मामलों में बिल्कुल भी असंभव है।

रोगों को पहचानने की एक प्रक्रिया के रूप में निदान का महत्व यह है कि प्रारंभिक, सटीक निदान तर्कसंगत और प्रभावी चिकित्सा का आधार है, और ज्यादातर मामलों में यह रोग के आगे के पाठ्यक्रम और परिणाम के लिए संभावित विकल्पों की भविष्यवाणी करने की अनुमति देता है।

सहित संक्रामक रोगों के निदान में एसटीडी एटियलॉजिकल फैक्टर (रोगज़नक़) की पहचान करने और बीमारी के चरण को स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण है, अर्थात्, एक एटियोट्रोपिक और पर्याप्त चिकित्सा का चयन करने के लिए आवश्यक जानकारी प्राप्त करें, बीमारी के पाठ्यक्रम और इसके पूरा होने के समय की भविष्यवाणी करें।

आधुनिक की विशिष्ट विशेषताएं प्रयोगशाला निदान   नए तरीकों के निरंतर विकास और ज्ञात विधियों और तकनीकों में सुधार कर रहे हैं। यह इस तथ्य के कारण है कि में पिछले दशकों में   संक्रामक रोगों के नैदानिक \u200b\u200bचित्र और उनके रोगजनन की विशेषताओं दोनों में निरंतर परिवर्तन होता है। उदाहरण के लिए, सुप्रसिद्ध बल्कि खतरनाक रोगजनकों से रोग के रूप मिट सकते हैं या इसके विपरीत: सशर्त रूप से रोगजनक या माना जाता है कि रोगजनक सूक्ष्मजीव गंभीर रूप धारण करते हैं। रोगजनक सूक्ष्मजीवों का ट्रोपिज़्म बदल रहा है (अन्य अंग और ऊतक प्रभावित होते हैं) और, परिणामस्वरूप, संक्रामक प्रक्रियाओं के नए रूप दिखाई देते हैं। संक्रमण के जीर्ण, लगातार रूप हैं और रोगजनकों की एंटीजेनिक संरचना में परिवर्तन होता है, सूक्ष्मजीव एक अप्रयुक्त राज्य में बदल जाते हैं। संक्रामक रोगों के पाठ्यक्रम के शास्त्रीय रूपों से विचलन और एटिपिकल रूपों की घटना दो परिस्थितियों से जुड़ी हुई है। सबसे पहले, आबादी के एक हिस्से में प्रतिरक्षा प्रणाली की स्थिति बदल गई है, इम्यूनोडिफ़िशिएंसी राज्य आम हो गए हैं विभिन्न प्रकृति का। दूसरे, रोगजनक स्वयं बदल रहे हैं। यही है, हम सूक्ष्मजीवों में विकासवादी प्रक्रिया के गवाह हैं।

यह सब निदान को जटिल बनाता है और उपचार की प्रभावशीलता को प्रतिकूल रूप से प्रभावित करता है। उपयोग की भूमिका आधुनिक तरीके   निदान के लिए प्रयोगशाला अनुसंधान वर्तमान में बहुत महत्वपूर्ण है।

संक्रामक रोगों के निदान के लिए, विभिन्न प्रयोगशाला और वाद्य विधियों का उपयोग किया जाता है, जिनमें से विशिष्ट स्थान पर रोग के प्रेरक एजेंट की पहचान करने के उद्देश्य से विशिष्ट तरीकों द्वारा कब्जा कर लिया जाता है और इस प्रकार, एटिऑलॉजिकल निदान की स्थापना की जाती है।

इस संदेश का विषय संक्रामक रोगों की प्रयोगशाला निदान के चयनित खंड हैं।

बुनियादी अवधारणाओं और संक्रमण के प्रयोगशाला निदान के तरीके

प्रयोगशाला निदान के प्रमुख संकेतक संक्रमणों के रोगजनकों (कवक, प्रोटोजोआ, बैक्टीरिया और वायरस) की पहचान करने के तरीकों की संवेदनशीलता और विशिष्टता है।

• संवेदनशीलता- यह इस सामग्री की न्यूनतम मात्रा है जिसे इस विधि द्वारा पता लगाया जा सकता है। सामग्री पूरे सूक्ष्मजीव और रोगज़नक़ अणुओं के टुकड़े, साथ ही संक्रमण के जवाब में मानव शरीर द्वारा उत्पादित विशिष्ट एंटीबॉडी हो सकती है। कम सामग्री एक विधि का पता लगा सकती है, इसकी संवेदनशीलता जितनी अधिक होगी। यदि एक प्रयोगशाला परीक्षण सूक्ष्मजीवों को प्रकट नहीं करता है जो नमूने में मौजूद हैं और यह पता लगाने के लिए कि एक परीक्षण प्रणाली विकसित की गई है, तो परिणाम को गलत नकारात्मक कहा जाता है। विधि की संवेदनशीलता जितनी अधिक होगी, उतना कम गलत-नकारात्मक [गलत (-)] परिणाम।
• विशेषता- यह विधि के नमूने में उपस्थिति को इंगित करने की विधि की क्षमता है, जिसके लिए एक परीक्षण प्रणाली विकसित की गई थी। यदि विधि सूक्ष्मजीवों के नमूने में उपस्थिति को इंगित करती है जो वहां निहित नहीं हैं, तो परिणाम को गलत सकारात्मक कहा जाता है। विधि की विशिष्टता जितनी अधिक होगी, उतना कम गलत-सकारात्मक [गलत (+)] परिणाम।

  प्रयोगशाला निदान के सभी तरीकों को दो समूहों में विभाजित किया जा सकता है: सूक्ष्मजीवों के प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष तरीके के तरीके।

• प्रत्यक्ष विधियाँइसलिए नाम दिया गया क्योंकि वे सीधे संक्रमण के प्रेरक एजेंटों या उस सामग्री की पहचान करते हैं जो रोगज़नक़ का हिस्सा है, या इसके द्वारा निर्मित है। ये आमतौर पर एंटीजन या आनुवंशिक पदार्थ होते हैं। प्रत्यक्ष विधियों में निम्नलिखित शामिल हैं (तालिका 1):

  तालिका 1. प्रत्यक्ष प्रयोगशाला नैदानिक \u200b\u200bविधियां
  तरीकों	विधि सिद्धांत	विशेषता	संवेदनशीलता
  जीवाणुतत्व-संबंधी	रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति का अलगाव	100% स्वर्ण मानक प्रयोगशाला निदान	1,000-10,000 सेल / एमएल
  साइटोलॉजिकल (माइक्रोस्कोपी)	दाग धब्बा परीक्षण	20-80%	1,000-100,000 कोशिका / मिली
  इम्यूनोसाइटोलॉजिकल और सीरोलॉजिकल	आरआईएफ, एलिसा के एंटीबॉडी से बंधने के बाद एंटीजन की पहचान	70-90%	1,000-100,000 कोशिका / मिली
  आणविक जैविक	रोगज़नक़ जीनोम में एक विशिष्ट डीएनए / आरएनए क्षेत्र का निर्धारण	99-100% "स्वर्ण मानक" के बराबर है	200 कोशिकाओं / एमएल (प्रति प्रतिक्रिया 1 सेल)

  झूठी (+) परिणाम कोशिकाविज्ञानी विधि के मामले में परिणाम का मूल्यांकन करने की प्रतिरोधकता के साथ, प्रतिरक्षाविज्ञानी विधियों के मामले में - एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की क्रॉस-प्रतिक्रिया के साथ जुड़ा हुआ है।

  प्रत्यक्ष तरीकों में गलत (-) परिणाम नैदानिक \u200b\u200bसामग्री के संग्रह के दौरान रोगज़नक़ की दुर्गमता के कारण हो सकता है, सूक्ष्मजीवविज्ञानी विधि के लिए - नमूने के परिवहन के दौरान एक सूक्ष्मजीव की मृत्यु और अनियंत्रित रूप के मामले में।

• अप्रत्यक्ष तरीकेइसलिए नाम दिया गया है क्योंकि सामग्री का पता रोगज़नक़ द्वारा ही नहीं लगाया जाता है, लेकिन इस प्रकार के संक्रमण के जवाब में किसी व्यक्ति द्वारा विकसित विशिष्ट एंटीबॉडी द्वारा, अर्थात। प्रतिरक्षात्मक हैं। इस तरह की विधियों में शामिल हैं: तारीफ बंधनकारी प्रतिक्रिया (CSC), अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (RNIF), माइक्रोइम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (MIF), पुनः संयोजक लिपोपॉलीसेकेराइड एलिसा (आर - एलिसा), एंजाइम इम्यूनोसे (एलिसा)। इन तरीकों की संवेदनशीलता 1000-100000 कोशिकाओं / एमएल है।

  लगभग सभी मामलों में प्रतिरक्षात्मक तरीकों का उपयोग करते समय, झूठे (+) परिणाम एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी के गैर-बाध्यकारी बंधन या एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की क्रॉस-प्रतिक्रिया से जुड़े होते हैं। नमूने में विशिष्ट एंटीबॉडी या एंटीजन की अपर्याप्त संख्या और निर्धारण विधियों की अपर्याप्त संवेदनशीलता के कारण गलत (-) परिणाम उत्पन्न होते हैं।

  आधुनिक की महत्वपूर्ण सफलताओं के बावजूद प्रयोगशाला निदान   व्यवहार में कोई भी विधि 100% संवेदनशीलता और विशिष्टता के संयोजन की गारंटी नहीं देती है। इसका मतलब है कि यह 100% सही उत्तर नहीं देता है। इसलिए, निदान करने के लिए, चिकित्सक को अक्सर कम से कम दो अलग-अलग तरीकों का उपयोग करने की आवश्यकता होती है, और प्रत्येक अध्ययन दो या तीन पुनरावृत्ति में सबसे अच्छा होता है। तपेदिक, क्लैमाइडिया और कुछ अन्य (1) जैसे रोगों के निदान में यह एक आवश्यकता है।

कक्षा ए, एम, जी के इम्युनोग्लोबुलिन का पता लगाने का नैदानिक \u200b\u200bमूल्य

आइए हम सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स (एलिसा द्वारा रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण) पर अधिक विस्तार से ध्यान दें। यह बहुत विशिष्ट एंटीबॉडी (एंटीबॉडी) के निर्धारण पर आधारित है जो मानव शरीर में सूक्ष्मजीवों - संक्रमण के रोगजनकों की उपस्थिति के जवाब में बनते हैं। ये एंटीबॉडी वर्ग एम, ए, जी के इम्युनोग्लोबुलिन (आईजी) हैं, एंटीबॉडीज एंटीजन के साथ बातचीत करके संक्रामक एजेंटों को बेअसर करते हैं। एक एंटीजन एक संक्रामक एजेंट (सूक्ष्मजीव) का एक विशिष्ट हिस्सा है जो मानव शरीर (प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया) में विशिष्ट एंटीबॉडी के गठन का कारण बनता है। सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का आधार एंटीजन-एंटीबॉडी की विशिष्ट बातचीत है। आइजीएम, आईजीए, आईजीजी कक्षाओं (तालिका 2) के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए निदान क्या पता चलता है पर विचार करें।

तालिका 2. ईएलआईएस द्वारा रक्त सीरम में एंटीबॉडी के एक अध्ययन के परिणामों के अनुसार एक संक्रामक रोग के चरण का निर्धारण
रोग का चरण (रूप)	रक्त सीरम में उपस्थिति के क्रम में एंटीबॉडी	शीर्षक गतिकी (2-3 सप्ताह की सीमा में)
प्राथमिक संक्रमण में तीव्र	IgM ⇒ IgG ⇒ IgA या - IgM ⇒ IgA ⇒ IgG ⇒    जल्दी या जल्दी आईजीजी	संक्रमण की शुरुआत के बाद बीत चुके समय के आधार पर, टाइटर्स में वृद्धि या कमी (7 वें दिन के बाद आईजीएम)
द्वितीयक संक्रमण और पुनर्सक्रियन (रिलेप्स)	आईजीजी ⇒ आईजीए, आईजीएम की लगभग पूर्ण अनुपस्थिति    ⇒ शुरुआती या शुरुआती आईजीजी	टाइटर्स में तेजी से वृद्धि या कमी
जीर्ण	IgG ⇒ IgA,    कभी-कभी केवल आई.जी.ए.    या केवल आई.जी.जी.	स्थायी निम्न टाइटर्स लगातार उच्च हो सकते हैं - गंभीर आरोही संक्रमण या प्रणालीगत घावों के मामले में।
दृढ़ता, कैरिज	IgA या IgG	स्थायी (कई सप्ताह) कम टाइटर्स (एंटीबॉडी हमेशा सूक्ष्मजीवों के बदल एंटीजन संरचना के कारण नहीं पाए जाते हैं)
लंबे समय से चली आ रही बीमारी	आईजीजी	लगातार कम titers

विभिन्न वर्गों के एंटीबॉडी का मात्रात्मक निर्धारण बीमारी के पाठ्यक्रम के चरण और प्रकृति को निर्धारित करने में मदद करता है। मात्रात्मक परिणामों की व्याख्या करते समय, यह ध्यान रखना आवश्यक है कि प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मानव शरीर   संक्रमण का विकास और इसके द्वारा निर्मित एंटीबॉडी का स्तर रोगजनकों की विशेषताओं, संक्रमण प्रक्रिया के चरण और प्रतिरक्षा प्रणाली की व्यक्तिगत विशेषताओं पर निर्भर करता है। गंभीर प्रतिरक्षादमन के मामले में, एटी संश्लेषण को पूरी तरह से दबाया जा सकता है। इसलिए, विशेष रूप से संक्रमण के असामान्य रूपों के साथ, एक निदान करने के लिए, डॉक्टर एक अध्ययन के मात्रात्मक परिणाम की स्पष्ट रूप से व्याख्या नहीं कर सकता है।

विभिन्न संक्रामक एजेंटों को एंटीबॉडी के मात्रात्मक पता लगाने के परिणामों का सही आकलन करने के लिए, युग्मित सीरा के सिद्धांत का उपयोग करना आवश्यक है (2-3 सप्ताह के बाद अध्ययन दोहराएं और परिणामों की तुलना करें)। इस तरह के अध्ययन एंटीबॉडी का पता लगाने की गतिशीलता का विश्लेषण करने का अवसर प्रदान करते हैं और इस प्रकार, प्राप्त करने के लिए आवश्यक जानकारी   संक्रामक प्रक्रिया के विकास के बारे में। 2-3 सप्ताह में एंटीबॉडी में चार गुना वृद्धि संक्रमण के विकास को इंगित करती है।

ऐसे युग्मित अध्ययन करने में सक्षम होने के लिए यह ठीक है कि मात्रात्मक एलिसा परिणामों की आवश्यकता है।

तीव्र संक्रमण का निर्धारण करने का पारंपरिक तरीका सीरम में IgM का पता लगाना है। आधुनिक नैदानिक \u200b\u200bपरीक्षण प्रणाली आईजीएम के अलावा अन्य शुरुआती एंटीबॉडी का पता लगाना संभव बनाती है, जैसे: 1) वायरस के शुरुआती वायरस के खिलाफ आईजीजी और 2) कम एवीजी आईजीजी। इसके अलावा, वायरस के शुरुआती प्रोटीनों में IgG एक प्राथमिक तीव्र संक्रमण और रिलेपेस (पुराने संक्रमण का गहरा हो जाना) और रीइन्फेक्शन, यानी, दोनों के मार्कर हैं। आईजीएम के विपरीत, तीव्र संक्रमण के सभी प्रकार, एक नियम के रूप में, केवल प्राथमिक संक्रमण के साथ उत्पन्न होते हैं।

पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन

आणविक नैदानिक \u200b\u200bविधियों के मेडिकल माइक्रोबायोलॉजी के अभ्यास का परिचय, निश्चित रूप से, एक महत्वपूर्ण घटना थी, क्योंकि यह मौलिक रूप से रोगों के रोगजनन के अध्ययन की संभावनाओं का विस्तार करता था, मौलिक रूप से सुधारित निदान और यहां तक \u200b\u200bकि उपचार के लिए नए दृष्टिकोणों की रूपरेखा। पीसीआर पर आधारित आणविक निदान की विधि, जो उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता का इष्टतम संयोजन देती है, अधिक आम होती जा रही है।

आणविक निदान, सामान्य रूप से, और विशेष रूप से पीसीआर, परीक्षण के नमूने में, विशिष्ट न्यूक्लिक एसिड की उपस्थिति के निर्धारण पर आधारित होते हैं।

डीएनए एक डबल-असहाय (डबल-स्ट्रैंडेड) बहुलक अणु है, न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम जिसमें शरीर के सभी गुणों को निर्धारित किया जाता है। कोशिका विभाजन में, डीएनए दोगुना हो जाता है, और मूल कोशिका की आनुवंशिक सामग्री की एक सटीक प्रतिलिपि दो बेटी कोशिकाओं में से प्रत्येक में प्रवेश करती है। डीएनए अणु को दोगुना करना प्रतिकृति कहा जाता है। दो प्रारंभिक (मैट्रिक्स) डीएनए श्रृंखलाओं पर, नई बेटी श्रृंखला (मैट्रिक्स के पूरक) का निर्माण किया जाता है। प्रतिकृति एक एंजाइमेटिक कॉम्प्लेक्स द्वारा प्रदान की जाती है, जिसका प्रमुख तत्व डीएनए पोलीमरेज़ है। डीएनए पोलीमरेज़ के लिए, मैट्रिक्स के अतिरिक्त, एक बीज (प्राइमर) की आवश्यकता होती है। यह बीज डीएनए पोलीमरेज़, जैसा कि यह था, लंबा है, मौजूदा मैट्रिक्स पर एक नया डीएनए स्ट्रैंड का निर्माण कर रहा है। आम तौर पर, एक सेल या वायरस के सभी डीएनए को प्रकृति में दोहराया जाता है, और इस प्रक्रिया का उत्पाद मूल डीएनए की दो समान प्रतियां हैं।

अब जब हमने संक्षेप में प्रतिकृति के बारे में सबसे महत्वपूर्ण बात को याद किया है, तो हम पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया के विवरण के लिए आगे बढ़ सकते हैं। पीसीआर 1983 में खोला गया था और अब व्यापक रूप से वैज्ञानिक और व्यावहारिक अनुसंधान के लिए उपयोग किया जाता है, संक्रामक और आनुवांशिक बीमारियों के निदान के क्षेत्र में, कुछ ऑन्कोलॉजिकल पैथोलॉजीज के शुरुआती निदान। इस पद्धति की खोज के लिए, 1995 में कैरी मुलिस को सबसे प्रतिष्ठित वैज्ञानिक पुरस्कार - नोबेल पुरस्कार दिया गया।

इस प्रतिक्रिया के दौरान, डीएनए को भी दोहराया जाता है, लेकिन प्रकृति में हमेशा की तरह नहीं। सबसे पहले, सूक्ष्मजीव के सभी डीएनए को दोहराया नहीं जाता है, लेकिन केवल इसका छोटा टुकड़ा (लक्ष्य)।

दूसरे, पीसीआर उत्पाद दो नहीं, बल्कि मूल लक्ष्य की लाखों प्रतियां हैं। इस एकाधिक प्रतिकृति को प्रवर्धन कहा जाता है।

में विभिन्न प्रकार और बैक्टीरिया की प्रजातियां, साथ ही वायरस, आनुवंशिक ग्रंथ (डीएनए के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम) भिन्न होते हैं। आधुनिक कंप्यूटर प्रोग्राम में विभिन्न जीवों के डिक्रिप्टेड डीएनए अनुक्रमों का एक डेटाबेस होता है। एक नैदानिक \u200b\u200bपीसीआर परीक्षण प्रणाली विकसित करते समय, एक छोटा डीएनए टुकड़ा (लक्ष्य) पाया जाता है जो एक विशिष्ट रोगज़नक़ के लिए कड़ाई से विशिष्ट है। पीसीआर का उपयोग करते हुए, इस क्षेत्र को प्रवर्धित किया जाता है और फिर प्रवर्धन उत्पाद (एम्प्लिकॉन) की पहचान agarose gel वैद्युतकणसंचलन द्वारा की जाती है।

किसी दिए गए सूक्ष्मजीव के लिए एक विशिष्ट डीएनए टुकड़े की पहचान करके, सूक्ष्मजीव को इस प्रकार निर्धारित किया जाता है।

संक्रमण के निदान का प्रत्येक चक्र तीन चरणों में होता है (चित्र।):

1. अवक्षेपण - डबल-फंसे डीएनए श्रृंखलाओं की बुनाई - एक एंजाइमेटिक प्रक्रिया नहीं है जो 95 0 सी के तापमान पर होती है।
2. प्राइमरों की पहुंच (एनीलिंग)। पीसीआर में प्रतिकृति प्रक्रिया शुरू करने के लिए, प्राइमरों का उपयोग किया जाता है - छोटे एकल-फंसे डीएनए (15-30 आधार लंबे), जो प्रतिक्रिया मिश्रण के अतिरिक्त जोड़े जाते हैं। वे विशेष रूप से (पूरक युग्म के सिद्धांत के अनुसार) छोटे वर्गों से जुड़े होते हैं जो चयनित लक्ष्य को बांधते हैं। यह चरण एंजाइमैटिक नहीं है और 55-65 0 पर प्रतिक्रिया मिश्रण के ऊष्मायन के दौरान होता है। प्राइमर केवल इस रोगज़नक़ के लिए विशिष्ट डीएनए टुकड़े के साथ संलग्न होते हैं और किसी अन्य डीएनए अनुक्रमों के साथ बातचीत नहीं करते हैं (और नैदानिक \u200b\u200bनमूने में बहुत सारे डीएनए होते हैं, जैसे मानव। और विभिन्न सूक्ष्मजीव)। यह वही है जो नैदानिक \u200b\u200bपीसीआर परीक्षण प्रणाली की पूर्ण विशिष्टता सुनिश्चित करता है। टेम्पलेट डीएनए के संबंध में अतिरिक्त डीएनए प्राइमर विधि की उच्च संवेदनशीलता प्रदान करता है। यही है, प्रारंभिक पीसीआर समाधान में प्राइमर लगाव के लिए एक लक्ष्य खोजने के लिए 100% संभावना है।
3. प्राइमर के अतिरिक्त के परिणामस्वरूप, संरचनाएं [डीएनए मैट्रिक्स + प्राइमर] बनती हैं, जो "बीज" कॉम्प्लेक्स हैं। प्राइमरों का पूरा होना शुरू होता है, 3 के अंत से शुरू होता है, मैट्रिसिस पर एकल-फंसे डीएनए टुकड़े के पूरक संश्लेषण द्वारा। यह प्रक्रिया एक विशेष एंजाइम - टैक पोलीमरेज़ (गर्मी प्रतिरोधी डीएनए पोलीमरेज़) और न्यूक्लियोटाइड्स (एक भवन सामग्री के रूप में) का उपयोग करके की जाती है।

   डिनैप्शन अवधि के बाद नव संश्लेषित डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए फिर से प्राइमर को बांधता है, जो मिश्रण में अधिक मात्रा में होते हैं। प्राइमर अनुक्रमों द्वारा सीमित विशिष्ट डीएनए अंशों को पूरा करने के बाद परिणामी संरचनाएं। इस प्रकार, भले ही केवल एक डीएनए अणु पीसीआर के लिए शुरुआती बिंदु था, 25-40 चक्रों के भीतर प्रवर्धन होता है, अर्थात। संश्लेषित है एक बड़ी संख्या   विशिष्ट डीएनए अंशों (एम्पलीकॉन्स) की (108-109 प्रतियां), agarose जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद प्रतिक्रिया का परिणाम रिकॉर्ड करने के लिए पर्याप्त है।

PCR एक साइकिल चालक या में किया जाता है thermocycler   - एक उपकरण जिसमें पूर्व निर्धारित तापमान परिवर्तन मोड को चक्रवाती रूप से स्वचालित रूप से प्रदर्शन किया जाता है, जिससे कई चरणों को 1, 2, 3 बार पारित किया जाता है।

प्रतिक्रिया agarose जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग किया जाता है। कैथोड से एनोड तक एक विद्युत क्षेत्र के प्रभाव में जेल में स्थानांतरित डीएनए अणुओं को नकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है, जबकि एक निश्चित अवधि में डीएनए के टुकड़ों का औसत मुक्त पथ उनके आकार पर निर्भर करता है। जेल में डीएनए एथिडियम ब्रोमाइड से सना हुआ है, जो इसे पराबैंगनी प्रकाश में दिखाई देता है। यदि पीसीआर के परिणामस्वरूप परीक्षण नमूने में एम्पलीकॉन्स (समान आकार के डीएनए टुकड़े) जमा होते हैं, तो वे शुरुआत से समान दूरी पर होंगे और जेल ट्रैक पर एक पट्टी के रूप में दिखाई देंगे। यदि जेल ट्रैक पर पट्टी की स्थिति प्राइमर की प्रयुक्त जोड़ी के लिए गणना से मेल खाती है, अर्थात। सकारात्मक नियंत्रण की पट्टी के रूप में शुरुआत से समान दूरी पर है, इसका मतलब है कि अध्ययन का परिणाम सकारात्मक है।

पीसीआर के परिणामों को ध्यान में रखते हुए, प्रत्येक प्रयोग में, नियंत्रण प्रदान किया जाता है - सकारात्मक और नकारात्मक। किसी भी नैदानिक \u200b\u200bपरीक्षण प्रणाली में अनुमोदित विनियम होने चाहिए, जिसमें उल्लिखित नियंत्रणों की उपस्थिति शामिल है।

एक सकारात्मक नियंत्रण एक नमूना है जो पहचान किए गए सूक्ष्मजीव के अनुरूप एक विशिष्ट आयाम के संचय के लिए डीएनए टेम्पलेट के साथ है।

एक नकारात्मक नियंत्रण पानी, मानव डीएनए, या सूक्ष्मजीवों के डीएनए को परिभाषित परीक्षण प्रणाली से निकटता से संबंधित है।

पीसीआर विधि के लाभ

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स सबसे आधुनिक और उन्नत प्रयोगशाला नैदानिक \u200b\u200bविधियों में से एक है, जो एक नमूने में संक्रामक रोग रोगजनकों की एकल कोशिकाओं के डीएनए का विशिष्ट पता लगाने की अनुमति देता है।

किसी भी अन्य पारंपरिक तरीकों से पीसीआर सहित आणविक नैदानिक \u200b\u200bविधियों के बीच एक बुनियादी अंतर है। यह अंतर यह है कि पारंपरिक तरीके सूक्ष्मजीवों (प्रोटीन, एंटीजन और अधिक जटिल संगठित विशेषताओं) के जीन की गतिविधि के उत्पादों को प्रकट करते हैं, जबकि पीसीआर सीधे आनुवंशिक सामग्री का खुलासा करते हैं। इस प्रकार, पीसीआर द्वारा सूक्ष्मजीव का पता लगाया जाता है, भले ही जीनोम के कामकाज की विशेषताएं, किसी भी असामान्य अभिव्यक्तियों की परवाह किए बिना।

हम कह सकते हैं कि पीसीआर अधिकतम संभव संवेदनशीलता तक पहुंचता है। पीसीआर परीक्षण प्रणालियों की संवेदनशीलता एक नमूने में 10-1000 कोशिकाएं हैं, जबकि एक नमूने में प्रतिरक्षाविज्ञानी और सूक्ष्म तरीकों की संवेदनशीलता 1000-100000 कोशिकाएं हैं। इसकी उच्च संवेदनशीलता के कारण, पीसीआर-आधारित परीक्षण प्रणाली उन मामलों में अपरिहार्य हैं जहां अध्ययन की गई सामग्री (रोगज़नक़) बहुत छोटी है।

इसकी उच्च संवेदनशीलता के कारण, पीसीआर परीक्षण की अनुमति देता है शीघ्र निदान   बीमारियों (जैसे के दौरान नियमित परीक्षा   आबादी), एंटीबायोटिक चिकित्सा की पृष्ठभूमि पर निदान को स्पष्ट करने के लिए, इलाज (उपचार की प्रभावशीलता) की जांच करने के लिए, और लगातार सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए भी। कुछ रोगजनकों के लिए, जैसे कि माइकोप्लाज़्मा होमिनिस, यूरियाप्लास्मा यूरियालिटिकम, गार्डनेरेला वेजिनालिस, कैंडिडा अल्बिकन्स, डायग्नोस्टिक पीसीआर टेस्ट सिस्टम की संवेदनशीलता अधिक नहीं होनी चाहिए। संवेदनशीलता संकेतक विशेष रूप से विकसित और अनुमोदित हैं, प्रति मिलीलीटर 105-6 कोशिकाओं के साथ शुरू होता है। इस तरह की परीक्षण प्रणाली इन सूक्ष्मजीवों (2,3) की नैदानिक \u200b\u200bरूप से महत्वपूर्ण मात्रा का पता लगाती है।

रोगजनक सूक्ष्मजीवों के कठिन रूप से खेती, अप्रयुक्त और लगातार रूपों की पहचान करते समय, केवल प्रत्यक्ष विधि जो रोगज़नक़ के डीएनए का पता लगाती है, आवश्यक निदान प्रतिक्रिया देती है। अन्य नैदानिक \u200b\u200bविधियां (प्रतिरक्षाविज्ञानी, जीवाणुविज्ञानी, सूक्ष्मदर्शी) कठिन या असंभव हैं। लगातार सूक्ष्मजीवों के मामले में, यह रोगज़नक़ों की प्रतिजनी संरचना में परिवर्तन या ऐसे सूक्ष्मजीवों के एक अनियंत्रित रूप में संक्रमण के कारण हो सकता है। अव्यक्त और पुराने संक्रमणों का निदान करते समय इसे याद रखना चाहिए।

पीसीआर विधि की उच्च विशिष्टता प्राइमरों के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम द्वारा निर्धारित की जाती है और रोगज़नक़ के लिए विशिष्ट डीएनए टुकड़ा (लक्ष्य) के लिए उनके लगाव के लिए शर्तें जो पीसीआर परीक्षण प्रणाली बनाते समय विशेष रूप से काम किया गया था। चुने गए प्राइमरों के आधार पर, पीसीआर परीक्षण प्रणाली एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों के जेनेरा, प्रजाति, सेरोटाइप और यहां तक \u200b\u200bकि रोगजनक और गैर-रोगजनक उपभेदों को अलग कर सकती है।

संक्रमणों के निदान के लिए पीसीआर का उपयोग करना, कई एंटीबायोटिक दवाओं के लिए रोगजनकों की संवेदनशीलता (या प्रतिरोध) निर्धारित करना संभव है। यह उन मामलों में विशेष रूप से सच है जहां अनुसंधान के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विधि को लागू करना असंभव है।

संक्रमण के प्रेरक एजेंटों वाले किसी भी नैदानिक \u200b\u200bसामग्री को पीसीआर विश्लेषण के लिए उपयुक्त है - रक्त, सीरम, लवण तरल पदार्थ, थूक, लार, गैस्ट्रिक रस, बायोप्सी सामग्री, स्मीयर, स्वैब। अध्ययन की गई सामग्री वस्तुओं से नमूने हो सकती है बाहरी वातावरण   (धुलाई, उंगलियों के निशान, स्मीयर, पानी, मिट्टी, आदि)।

पीसीआर एक एकीकृत और स्वचालित विधि है जो आपको इस पीसीआर परीक्षण प्रणाली के उपयोग के लिए परमिट में स्वीकृत नियमों का मानक रूप से अनुपालन करने की अनुमति देता है और परिणामों की उच्च सटीकता और प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करता है।

पीसीआर प्रयोगशाला निदान - तेज और विश्वसनीय तरीका है   संक्रामक रोगों के रोगजनकों की पहचान। अध्ययन के लिए सामग्री की डिलीवरी की तारीख से 48 घंटे के बाद पीसीआर प्रयोगशाला जवाब देती है। (प्रत्येक नमूने के लिए शुद्ध अध्ययन का समय केवल कुछ घंटों का है।)

एक नैदानिक \u200b\u200bनमूने में, 20 से अधिक रोगजनकों की उपस्थिति एक साथ निर्धारित की जा सकती है।

नैदानिक \u200b\u200bनमूना अध्ययन का संचालन करते समय एक महत्वपूर्ण पहलू अनुपालन है नैदानिक \u200b\u200bसामग्री के संग्रह और भंडारण के लिए नियम। यहाँ कुछ सामान्य सिफारिशें दी गई हैं:

• नैदानिक \u200b\u200bसामग्री सूक्ष्मजीवों के निवास स्थान और संक्रमण के विकास से ली गई है (इसके लिए प्रवेश द्वार, वितरण पथ, प्रजनन स्थल और वांछित सूक्ष्मजीवों के अलगाव के रास्ते) को ध्यान में रखना आवश्यक है।
• एकत्रित सामग्री में डिस्चार्ज की मात्रा छोटी होनी चाहिए ("एक सिर के साथ" से अधिक नहीं)। अतिरिक्त निर्वहन, बलगम और मवाद डीएनए निष्कर्षण की गुणवत्ता को प्रतिकूल रूप से प्रभावित करते हैं और भंडारण और परिवहन के दौरान डीएनए के क्षरण में योगदान करते हैं।
• नैदानिक \u200b\u200bसामग्री के संग्रह के लिए, केवल डिस्पोजेबल ब्रश या टैम्पोन का उपयोग करें। जब एक समाधान के साथ एक प्रयोगशाला परीक्षण ट्यूब में नैदानिक \u200b\u200bसामग्री का परिचय, बाँझपन का निरीक्षण।

आणविक निदान की प्रासंगिकता

सबसे ज्यादा एक हड़ताली उदाहरण, आणविक निदान की प्रासंगिकता को प्रदर्शित करता है, मानव पेपिलोमाविर्यूज़ द्वारा उच्च ऑन्कोजेनिक जोखिम के साथ संक्रमण का पता लगाना है। सभी पेपिलोमाविर्यूस घातक वृद्धि का कारण नहीं बनते हैं। वायरस के विशिष्ट जीनोटाइप जो उच्च संभावना वाले कैंसर का कारण बनते हैं, और तथाकथित सौम्य जीनोटाइप। पूर्व में जीनोटाइप 16, 18 (हमारे क्षेत्र में आम), 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 55, 56, 58, 59, 68 (ME180), MM4 (W13B), MM7 शामिल हैं। P291), और MM9 (P238A)। सौम्य जीनोटाइप में 6, 11, 40, 42, 53, 54, 57, 66 और MM8 (P155) शामिल हैं। पैपिलोमावायरस जीनोटाइप की पहचान संभव है और पीसीआर (4,5) का उपयोग करके किया जाता है।

पैपिलोमावायरस प्रकार 16.18 कोशिकाओं में बना रहता है स्क्वैमस उपकला   गर्भाशय ग्रीवा, साल के लिए नैदानिक \u200b\u200bअभिव्यक्तियों (5 साल तक, ऊष्मायन अवधि) के बिना, ध्यान देने योग्य नियोप्लासिस के गठन तक। ऐसे मामलों में प्रारंभिक निदान केवल संभव है निवारक परीक्षाएं   पीसीआर का उपयोग कर जनसंख्या। पेपिलोमावायरस प्रकार के डीएनए का पता लगाने के मामले में जो उच्च संभावना के साथ कैंसर का कारण बनते हैं, रोगी को एक ऑन्कोलॉजिस्ट से परामर्श करना चाहिए, महीने में एक बार उनसे मिलने, नैदानिक \u200b\u200bअभिव्यक्तियों की निगरानी करें। इस प्रकार, इस मामले में पीसीआर प्रारंभिक निदान को संभव बनाता है, जो गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर को रोकने या न शुरू करने में मदद करता है।

कई मामलों में, रोग के कुछ चरणों में, रोगजनकों को शास्त्रीय सूक्ष्मजीवविज्ञानी तरीकों से अलग नहीं किया जा सकता है। यह इस तथ्य के कारण है कि सूक्ष्मजीव उपकला कोशिकाओं के अंदर स्थित हो सकते हैं, ऊतकों या बलगम में (उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया, माइकोप्लाज्मा, यूरियाप्लाज्म, सभी वायरस इंट्रासेल्युलर स्थानीयकरण की विशेषता है, और ट्राइकोमोनाड और गोनोकोसी दोनों इंट्रासेल्युलर और बाह्यकोशिकीय हो सकते हैं)। इसके अलावा, कुछ बैक्टीरिया, कुछ कारकों के प्रभाव में, तथाकथित असंबद्ध रूपों या असंस्कृत राज्य में पारित हो सकते हैं। एक उदाहरण क्लैमाइडिया का चिकित्सा अनुसंधान है। संक्रमण साइट में क्लैमाइडिया ट्रेकोमैटिस का पता लगाने की अवधि की तुलना टिशू कल्चर के तरीकों, प्रत्यक्ष प्रतिदीप्ति, पीसीआर (डीएनए का पता लगाने) और वेस्टर्न ब्लॉट (आरएनए डिटेक्शन) का उपयोग करके की गई थी। यह पाया गया कि न्यूक्लिक एसिड का निर्धारण करने के तरीके पारंपरिक तरीकों की तुलना में 4 सप्ताह लंबे (16 सप्ताह बनाम 12 सप्ताह के प्रारंभिक संक्रमण के बाद) के प्रकोप में रोगज़नक़ का पता लगाते हैं। इस काम में, एक असंक्रामक राज्य को संक्रामक प्रक्रिया के दौरान क्लैमाइडिया के संक्रमण की संभावना के बारे में एक निष्कर्ष निकाला गया था। इस स्थिति में, क्लैमाइडिया सूजन का कारण बनता है या उपकला कोशिकाओं में बना रहता है, लेकिन सूक्ष्मजीवविज्ञानी विधि (6) द्वारा इसका पता नहीं लगाया जाता है।

वर्तमान में, सामग्री का एक बड़ा सौदा आणविक निदान की प्रासंगिकता को दर्शाता है, लेकिन हम इस प्रकाशन की सीमित मात्रा के कारण अन्य उदाहरणों पर विचार नहीं कर सकते हैं।

प्रयोगशाला नैदानिक \u200b\u200bविधियों का उपयोग करने के लिए रणनीति

पर आधुनिक चरण   संक्रामक रोगों की प्रयोगशाला निदान का विकास, एक एकीकृत दृष्टिकोण की स्पष्ट आवश्यकता, जिसमें संक्रामक रोग के एटियलॉजिकल निदान की स्थापना के लिए विभिन्न प्रयोगशाला विधियों का उपयोग करना शामिल है। डॉक्टर इतिहास और नैदानिक \u200b\u200bअभिव्यक्तियों का अध्ययन करने के बाद प्रयोगशाला अनुसंधान की एक विशेष विधि के उपयोग पर निर्णय लेता है। रोगजनकों की जीव विज्ञान की विशेषताओं और मानव प्रतिरक्षा प्रणाली के साथ उनकी बातचीत के साथ-साथ रोग के रूप के आधार पर तरीकों के विभिन्न संयोजनों का उपयोग किया जाता है।

उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया, हर्पीज वायरस, टॉक्सोप्लाज्मा की प्रयोगशाला निदान के लिए, पीसीआर और एलिसा अध्ययन के परिणामों का विश्लेषण किया जाता है। और माइकोप्लाज्मोसिस और यूरियाप्लाज्मोसिस की प्रयोगशाला निदान में, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के निर्धारण के साथ संस्कृतियों के अलगाव के साथ पीसीआर के संयोजन का उपयोग किया जाता है। गैर-विशिष्ट सशर्त रूप से रोगजनक माइक्रोफ्लोरा की पहचान करने के लिए, स्मीयर माइक्रोस्कोपी और संस्कृतियों को अलग करने के लिए एक सूक्ष्मजीवविज्ञानी विधि का उपयोग किया जाता है।

चिकित्सक रोगी के इतिहास, नैदानिक \u200b\u200bअभिव्यक्तियों और प्रयोगशाला नैदानिक \u200b\u200bडेटा के अध्ययन के आधार पर एक निदान करता है।

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जैविक पीसीआर के लिए, विभिन्न जैविक सामग्रियों का उपयोग किया जा सकता है जिनमें रोगाणुओं या टुकड़े हो सकते हैं।

पुरुषों और महिलाओं में जननांग अंगों के संक्रमण की पहचान करने के लिए, विश्लेषण के लिए, जननांग अंगों से छुट्टी, एक धब्बा मूत्रमार्गगर्भाशय ग्रीवा, साथ ही मूत्र से धब्बा।

वायरल हेपेटाइटिस सी और एचआईवी संक्रमण का निदान करने के लिए, रक्त विश्लेषण के लिए लिया जाता है।

संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस के निदान के लिए गले में खराबी का उपयोग किया जा सकता है।

परीक्षा से पहले, अपने चिकित्सक से जांचना सुनिश्चित करें कि विश्लेषण के लिए किन सामग्रियों का उपयोग किया जाएगा।

पीसीआर परिणामों की व्याख्या और व्याख्या

निम्नलिखित पीसीआर विश्लेषण परिणाम संभव हैं:

एक नकारात्मक परिणाम का मतलब है कि जैविक सामग्री में संक्रमण का कोई निशान नहीं पाया गया था जो अध्ययन के अधीन था। ज्यादातर मामलों में नकारात्मक परिणाम   पीसीआर विश्लेषण इंगित करता है कि मानव शरीर में कोई संक्रमण नहीं है, जिसके निशान उन्होंने परीक्षा द्वारा पता लगाने की कोशिश की।

एक सकारात्मक परिणाम का मतलब है कि जैविक सामग्री में संक्रमण के निशान का पता लगाया गया था जो अध्ययन के अधीन था। उच्च डिग्री सटीकता के साथ एक सकारात्मक पीसीआर परिणाम एक विशेष संक्रमण की उपस्थिति को इंगित करता है।

संक्रमण का निदान करने के लिए पीसीआर कितना सही है?

पीसीआर विधि अत्यधिक सटीक, विशिष्ट और संवेदनशील है। इसका मतलब है कि यह विश्लेषण   सक्षम:

1. संक्रमण की उपस्थिति या अनुपस्थिति का सटीक निर्धारण;
2. निर्दिष्ट करें कि किस प्रकार का संक्रमण (विशिष्टता);
3. जैविक सामग्री में रोगाणुओं की बहुत कम डीएनए सामग्री के साथ एक संक्रमण का भी पता लगाया गया है जिसकी जांच (संवेदनशीलता) की गई है।

संक्रमण के निदान के लिए एंजाइम से जुड़े इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) और अन्य प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों के विपरीत, पीसीआर में झूठे नकारात्मक परिणाम उत्पन्न होने की संभावना बहुत कम है (विश्लेषण वास्तव में होने के दौरान संक्रमण की अनुपस्थिति को दर्शाता है) और लगभग कभी भी गलत परिणाम नहीं देता है (विश्लेषण से पता चलता है) संक्रमण की उपस्थिति जबकि यह वास्तव में नहीं है)।

पीसीआर, या अन्यथा पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन, विभिन्न संक्रामक रोगों की प्रयोगशाला निदान की एक विधि है।

इस विधि को कैरी मुलिस ने 1983 में वापस विकसित किया था। प्रारंभ में, पीसीआर का उपयोग केवल वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए किया गया था, लेकिन थोड़ी देर बाद इसे व्यावहारिक चिकित्सा के क्षेत्र में पेश किया गया था।

विधि का सार डीएनए और आरएनए टुकड़ों में संक्रमण के प्रेरक एजेंट की पहचान करना है। प्रत्येक रोगज़नक़ का अपना संदर्भ डीएनए टुकड़ा होता है, जो बड़ी संख्या में इसकी प्रतियों के निर्माण को ट्रिगर करता है। इसकी तुलना डीएनए संरचना की जानकारी वाले मौजूदा डेटाबेस से की जाती है। विभिन्न प्रकार   सूक्ष्मजीवों।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का उपयोग करके, आप न केवल संक्रमण की पहचान कर सकते हैं, बल्कि इसे एक मात्रात्मक मूल्यांकन भी दे सकते हैं।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग कब किया जाता है?

जैविक सामग्री का पीसीआर विश्लेषण अव्यक्त सहित विभिन्न मूत्रजनन संक्रमणों का पता लगाने में मदद करता है, जो विशेष लक्षणों के साथ खुद को प्रकट नहीं करते हैं।

यह शोध विधि आपको किसी व्यक्ति में निम्नलिखित संक्रमणों की पहचान करने की अनुमति देती है:

• दाद सिंप्लेक्स वायरस दोनों प्रकार के;
• एचआईवी संक्रमण
• क्लैमाइडिया;
• ureaplasmosis;
• कैंडिडिआसिस;
• mycoplasmosis;
• trichomoniasis;
• साथ ही हेपेटाइटिस बी और सी, तपेदिक, हेलिकोबैक्टीरियोसिस, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस।

गर्भावस्था की तैयारी के दौरान और उसके दौरान, एक महिला को विभिन्न जननांग संक्रमणों के निदान के लिए आवश्यक रूप से पीसीआर निर्धारित किया जाता है।

पीसीआर अध्ययन के लिए जैविक सामग्री

पीसीआर द्वारा संक्रमण का पता लगाने के लिए, निम्नलिखित का उपयोग किया जा सकता है:

• मूत्र, ग्रीवा नहर से एक धब्बा (महिलाओं में), मूत्रमार्ग से एक धब्बा, जननांगों से निर्वहन - जननांग संक्रमण के लिए परीक्षण के लिए;
• रक्त - एचआईवी संक्रमण और हेपेटाइटिस सी के लिए परीक्षण के लिए;
• गला स्वैब - संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस के लिए परीक्षण के लिए।

संक्रमण के पीसीआर निदान के फायदे और नुकसान

संक्रमणों के लिए पीसीआर परीक्षणों के लाभों में शामिल हैं:

1. सार्वभौमिकता - जब अन्य नैदानिक \u200b\u200bविधियां शक्तिहीन होती हैं, तो पीसीआर किसी भी आरएनए और डीएनए का पता लगाता है।
2. विशिष्टता। इस विधि का उपयोग कर परीक्षण सामग्री में, एक विशेष रोगज़नक़ के विशिष्ट एक न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम का पता लगाया जाता है। पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया एक ही सामग्री में कई अलग-अलग रोगजनकों की पहचान करना संभव बनाती है।
3. संवेदनशीलता। इस पद्धति का उपयोग करके संक्रमण का पता लगाया जाता है, भले ही इसकी सामग्री बहुत छोटी हो।
4. क्षमता। संक्रमण के प्रेरक एजेंट की पहचान करने में बहुत कम समय लगता है - बस कुछ ही घंटे।
5. इसके अलावा, पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया मानव शरीर की प्रतिक्रिया का पता लगाने में मदद करती है कि इसमें रोगजनक सूक्ष्मजीवों की पैठ नहीं है, लेकिन एक विशिष्ट रोगज़नक़ है। इसके कारण, विशिष्ट लक्षणों के साथ स्वयं प्रकट होने से पहले ही किसी रोगी में किसी बीमारी का पता लगाना संभव है।

इस नैदानिक \u200b\u200bविधि के नुकसान में फिल्टर के साथ प्रयोगशाला परिसर को लैस करने की आवश्यकताओं के सख्त अनुपालन की आवश्यकता शामिल है उच्च डिग्री   सफाई ताकि अन्य जीवित जीवों के डीएनए टुकड़े के साथ विश्लेषण के लिए उठाए गए जैविक सामग्री का कोई संदूषण न हो।

कभी-कभी पीसीआर द्वारा किया गया विश्लेषण एक निश्चित बीमारी के स्पष्ट लक्षणों की उपस्थिति में एक नकारात्मक परिणाम दे सकता है। यह जैविक सामग्री एकत्र करने के लिए नियमों का पालन न करने का संकेत दे सकता है।

उसी समय सकारात्मक परिणाम   विश्लेषण हमेशा इस बात का सबूत नहीं होता है कि रोगी को कोई विशिष्ट बीमारी है। इसलिए, उदाहरण के लिए, उपचार के बाद, एक निश्चित समय के लिए पहले से ही मृत रोगज़नक़ पीसीआर विश्लेषण का सकारात्मक परिणाम देता है।